人神经生长因子（hNGF）纯化及活性监测（悬赏60万解决问题）

tongke

随着人类老龄化进程，阿尔茨海默病（AD）,帕金森病(PD)的发病率日益增加，这些神经退行性疾病和各种周围神经损伤疾病及颅脑外伤、急性脑血管意外、新生儿缺血缺氧性脑病、小儿脑瘫，脊髓损伤等中枢神经损伤疾病均严重威胁人类的健康。神经生长因子（NGF）是一种对神经细胞起营养作用的蛋白分子，在神经元的生长发育、递质的合成、轴突的生长及细胞的凋亡等阶段起着重要作用。在神经系统发育期，能控制神经元存活数量促进其分化，刺激胞体及树突的发育以及诱导神经纤维定向生长。神经系统发育成熟后，仍然起着维持对其有依赖性的交感神经元的存活和感觉神经元、中枢神经元群的功能，促进成熟神经元轴索的分支、细胞间的相互联系，修复周围和中枢神经损伤，促进神经细胞再生等重要作用。多项研究均表明：NGF及其受体水平的失调在人类某些疾病的发生，发展过程中扮演了重要作用，极度活跃会导致炎性疼痛或是某些癌症的生成；活性丧失则会导致神经退化变性，神经性疼痛或是由于细胞无法正常分化而形成的癌症。

贵州泛特尔生物技术有限公司致力于从胎盘中提取NGF，且提取的NGF是目前唯一对神经损伤的疾病模型——糖料病周围神经有效的药物之一。特别的是NGF作为治疗神经轴突损伤的唯一有效药物，目前还没有替代产品。目前已获得国家新药证书。

1、我们曾在纯化研究过程中确认基于鼠NGF抗体的WB显色结果，因此可以相对确认hNGF在人胎盘组织中的存在，但具体的单位胎盘中hNGF存在的量，以及hNGF在分离过程中的稳定性，尚待了解。目前市售相应的ELISA试剂盒对于我们样品测定误差较大，且重复性较差。需解决方案：确定一种简易可行的方法测定人胎盘中hNGF含量（ELISA法）。

2、根据文献报道及我们自身实验研究，hNGF在胎盘组织中含量较小，如何从胎盘组织中提取出更多的hNGF也成为制约我们的难点，且在分离纯化过程中没有直观有效的检测方法来跟踪判断；需解决方案：确定最佳的抽提模式。

3、人胎盘中含有多种物质，只有去除大量杂蛋白及对目标蛋白的高倍浓缩后才有可能得到纯品，基于以上两个方面，我们也做了相应研究，包括沉淀法、超滤法、层析法但效果并不理想，需寻找更好、更有效的方法达到去除大量杂蛋白、目标产物高倍浓缩的效果。需解决方案：除杂及高倍浓缩方案的优选。

上述3个难题，解决者可解决其中任意一个，也可一并解决。